Cas9是Rna引导的DNA核酸内切酶。该酶与CRISPR（聚集的规则间隔短回文重复序列）适应性免疫系统相关联各种类型的细菌，包括化脓性链球菌Casg，能够解开外源DNA（如质粒DNA或入侵噬菌体DNA），然后检查与20pacer互补的位点。指导RNA的区域。如果DNA底物与指导RNA互补，则Cas9切割入侵的DNA。Cas9蛋白作为基因组工程工具受到了全世界的关注。DNA中的双链断裂导致的DNA断裂可以使基因失活或通过非同源末端连接引入异源基因。和同源重组，分别在许多实验室模型生物中。此外，Cas9几乎可以切割与其相关的指导RNA互补的任何序列。在人类细胞中使用CRISPR/Cas9系统已经证明了基因缺失和基因替代。下面让我们一起来看看Cas9 ELISA试剂盒(NB-E1372HS)的测定程序：

1. 向抗Cas9抗体包被的平板中加入100μlCas9未知样品或标准品。每个Cas9未知样品，标准品和空白品应一式两份进行测定。

2. 在室温下在轨道振荡器（200-500 rpm）上孵育1小时。

3. 每孔用250μL 1X洗涤缓冲液洗涤微孔条3次，每次洗涤之间彻底抽吸。最后一次洗涤后，清空孔并在吸水垫或纸巾上轻敲微孔条，以除去多余的1X洗涤缓冲液。

4. 向每个孔中加入100μL稀释的生物素化抗Cas9抗体。在室温下在轨道振荡器（200-500 rpm）上孵育1小时。

5. 根据上述步骤3，清洗带孔3次。

6. 向每个孔中加入100μL稀释的链霉亲和素酶缀合物。在轨道振荡器（200-500 rpm）上在室温下孵育1小时。

7. 根据上述步骤3，清洗带孔3次。立即进行下一步。

8. 将基板溶液加热至室温。向每个孔（包括空白孔）中加入100μL底物溶液。在室温下在轨道振荡器上孵育。实际孵育时间可能在2-30分钟之间变化。

9. 通过向每个孔（包括空白孔）中加入100μL终止溶液来终止酶反应。应立即读取结果（颜色会随着时间的推移而褪色）。

10. 使用450 nm作为主波长，在分光光度计上读取每个微孔的吸光度。

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